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　1　 范圍
　　本標準規定了使用氣相色譜–質譜法測定化妝品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的含量。
　　本標準適用于粉、霜、露、膏、乳、油、液類化妝品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的測定。
　　本標準的濃度適用范圍為0.5 mg/Kg～10 mg/Kg，4-氨基偶氮苯及聯苯胺的檢出限（3）均為0.5 mg/Kg，定量下限（10）分別為2.0 mg/Kg、2.5 mg/Kg。

　　2　 原理
　　試樣在氨水-氯化銨緩沖溶液（pH = 9.5）中經叔丁基甲醚超聲萃取后，使用硅膠-中性氧化鋁混合填充的固相萃取小柱進行凈化，叔丁基甲醚為淋洗液，濃縮后進樣，經氣相色譜分離、質譜檢測器測定，使用保留時間、待測組分特征離子豐度比雙重模式進行定性，外標法對各組分定量離子峰面積進行定量。

　　3　 試劑及材料
　　除特別說明外，所有試劑均為分析純；水為符合GB/T 6682規定的一級水。
　　3.1　 標準物質：4-氨基偶氮苯，純度≥99.0%。
　　3.2　 標準物質：聯苯胺，純度≥98.5%。
　　3.3　 正己烷：色譜純。
　　3.4　 甲醇：色譜純。
　　3.5　 叔丁基甲醚：色譜純。
　　3.6　 無水硫酸鈉。
　　3.7　 氯化銨。
　　3.8　 氨水：25%。
　　3.9　 氯化鈉。
　　3.10　 硅膠：100～200目，使用前于160 ℃下烘12 h。
　　3.11　 中性氧化鋁：100～200目，使用前于180 ℃下烘12 h。
　　3.12　 氨水–氯化銨緩沖溶液：稱取13.4 g 氯化銨、量取18.5 mL氨水于250 mL燒杯中，加水溶解后轉移至500 mL容量瓶，定容，配制成pH=9.5的緩沖溶液。
　　3.13　 標準溶液
　　3.13.1　 4-氨基偶氮苯標準儲備溶液：準確稱10.0 mg 4-氨基偶氮苯準品于10 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解，并用甲醇定容至刻度，溶液濃度為1 mg/mL。將標準溶液轉移到安瓿瓶中于4℃保存。
　　3.13.2　 聯苯胺標準儲備溶液：準確稱10.0 mg聯苯胺準品于10 mL容量瓶中，加入少量甲醇溶解，并用甲醇定容至刻度，溶液濃度為1 mg/mL。將標準溶液轉移到安瓿瓶中于4℃保存。
　　3.13.3　 混合標準中間溶液：取一定量4-氨基偶氮苯和聯苯胺的儲備液，用甲醇稀釋成混合標準中間溶液，溶液濃度為0.1 mg/mL。將混合標準中間溶液轉移到安瓿瓶中于4℃保存。
　　3.13.4　 混合標準工作液：用甲醇將一定量的混合標準中間溶液配制成相應濃度的混合標準工作液。將混合標準工作液轉移至安瓿瓶中于4℃保存。

　　4　 儀器和設備
　　4.1　 氣相色譜-質譜儀。
　　4.2　 分析天平：感量0.0001 g。
　　4.3　 超聲波振蕩器。
　　4.4　 離心機。
　　4.5　 氮氣吹掃裝置。
　　4.6　 玻璃固相萃取柱：內徑1 cm，長度10 cm。
　　4.7　 圓底螺口玻璃離心管：50 mL。
　　4.8　 濾膜：0.45 μm有機相濾膜。
　　4.9　 分液漏斗振蕩器。
　　4.10 K-D濃縮瓶：30 mL。

　　5　 分析步驟
　　5.1　 提取
　　稱取0.5 g試樣（精確到0.001 g）50 mL圓底螺口玻璃離心管（4.7），加入1.0 mL氨水–氯化銨緩沖溶液（3.12），振蕩混勻，加入10 mL叔丁基甲醚，密封于45 ℃下超聲萃取15 min。按照化妝品類型進行以下樣品操作：
　　1）對于液態的化妝品，如爽膚水、啫喱水、香水等，待樣品冷卻后，加入10 mL水、5 g氯化鈉，在分液振蕩器上振蕩10 min，取下，離心5 min，移取5 mL上層溶液，加入0.5 g無水硫酸鈉靜置15 min，將無水硫酸鈉除水后的溶液轉移至30 mL K-D濃縮瓶（4.10）中溶液用緩慢的氮氣流吹至近干，濃縮過程中采用8 mL叔丁基甲醚分三次淋洗K-D濃縮瓶內壁，最后用叔丁基甲醚定容至1.0 mL，過0.45 μm濾膜（4.8），供GC-MS測定。
　　2）對于固體或膏狀的化妝品，如洗發水、沐浴露、染發劑、指甲油、胭脂等，待樣品冷卻后，離心5 min，移出上層溶液，加入0.5 g無水硫酸鈉靜置15 min；將溶液轉移至30 mL K-D濃縮瓶（4.10）中濃縮至1.0 mL，濃縮過程中采用8 mL正己烷分三次淋洗K-D濃縮瓶內壁，用緩慢的氮氣流將溶液吹至近干，加入0.5 mL正己烷溶解后進行以下凈化步驟：
　　稱取800 mg硅膠和1200 mg中性氧化鋁（2:3，m/m），充分混勻，用干法裝入玻璃固相萃取柱，輕敲至實。使用前用4 mL叔丁基甲醚預淋洗凈化柱，棄去淋洗液。將上述正己烷溶液轉移至硅膠–中性氧化鋁混裝的凈化柱，并用1 mL正己烷分兩次洗滌器皿，洗滌液轉移至固相萃取小柱。待樣品過柱后，用15.0 mL叔丁基甲醚將目標物洗脫，用30 mL K-D濃縮瓶（4.9）收集洗脫液，氮氣吹掃、濃縮至近干，濃縮過程中用8 mL叔丁基甲醚分三次淋洗K-D濃縮瓶內壁，叔丁基甲醚定容至1.0 mL，供GC-MS測定。
　　5.2　 測定
　　5.2.1　 氣相色譜-質譜檢測參考條件
　　進樣口溫度300℃。載氣為氦氣（純度≥99.999%），恒流方式，流速1.0 mL/min。色譜柱為DB-35 MS柱，30 m × 0.25 mm（i.d.）× 0.25 μm，或相當者；柱升溫程序為：初始溫70 ℃，保持0.5 min后以30 ℃/min升至270 ℃，保持2.0 min，再以25 ℃/min升至310 ℃至待測物質全部流出。進樣方式為分流進樣模式，分流比為7:1，進樣量1.0 μL。離子源為EI源，電離能量：70 eV。色譜-質譜接口溫度280℃，四極桿溫度150 ℃，離子源溫度230 ℃。溶劑延遲3 min。測量方式為全掃描/選擇離子監測（Scan/SIM）同時采集模式，兩種待測物質的參數見表1。

　　表1　4-氨基偶氮苯和聯苯胺的保留時間及特征離子

注：選擇離子中帶“*”的為定量離子。
　　5.2.2　 氣相色譜-質譜分析及結果確證
　　根據試樣中被測物質含量，選定適宜濃度標準工作液，使待測樣液中4-氨基偶氮苯、聯苯胺的響應值均在儀器檢測的線性范圍內。如果樣液的檢測響應值超出儀器檢測的線性范圍，可適當稀釋后進行測定。
　　在5.2.1氣相色譜–質譜條件下，4-氨基偶氮苯、聯苯胺標準物質的參考保留時間和氣相色譜–質譜選擇離子色譜圖見圖1。

　　按照5.2.1條件，測定標準工作液及試樣溶液。參考表1、表2中的保留時間、待測組分的特征離子豐度指標進行確證。
　　
　　表2　4-氨基偶氮苯和聯苯胺的特征離子豐度指標

注：允許相對偏差為特征離子相對于定量離子豐度的偏差。

　　6　 結果計算
　　6.1　 液態樣品結果計算
　　試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺含量分別按（1）計算，結果保留到小數點后二位：

　　
　　式中：
　　　　　Wi — 試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的含量，單位為 mg /Kg；
　　　　　ci — 標準校正工作曲線得到的樣品中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的濃度，單位為mg /L；
　　　　　V — 樣液最終定容體積，單位為 mL；
　　　　　m — 試樣的質量，單位為 g。

　　6.2　 固態或膏狀樣品的結果計算
　　試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺含量分別按（2）計算，結果保留到小數點后一位：

　　式中：
　　　　　Wi — 試樣中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的含量，單位為 mg /Kg；
　　　　　ci — 標準校正工作曲線得到的樣品中4-氨基偶氮苯或聯苯胺的濃度，單位為mg /L；
　　　　　V — 樣液最終定容體積，單位為 mL；
　　　　　m — 試樣的質量，單位為 g。

　　7　 方法回收率、精密度
　　7.1　 回收率
　　本方法中4-氨基偶氮苯和聯苯胺的回收率在85%～115%之間。
　　7.2　 精密度
　　在重復性條件下獲得兩次獨立測試結果的絕對差值不大于這兩次測定結果算術平均值的15%。