附件4：
體外診斷試劑生產及質量控制技術指導原則
——金標類診斷試劑生產及質量控制技術指導原則
（征求意見稿）
本類金標試劑是指應用膠體金免疫技術，采用膠體金標記的抗體或抗原包被于玻璃纖維膜、聚脂膜或其他載體，將相關抗原或抗體固相連接在硝酸纖維膜，應用層析法的原理檢測樣品中的抗原或抗體的快速檢測試劑。本技術指導原則適用于第三類體外診斷試劑中金標試劑的生產及質量控制，鑒于本類診斷試劑所應用的原理、方法、分類等的復雜性，本指導原則難以一一涵蓋，僅從試劑的主要原材料、制備工藝、半成品及成品提出質量控制要點，其他診斷試劑可作參考。國家藥品監督管理部門將根據科學技術發展的需要對本技術指導原則適時組織修訂。
一、基本原則
（一）研制、生產用的各種原料、輔料應當制定相應的質量指標，并應符合有關法規的要求。
（二）診斷試劑的生產必須按《藥品生產和質量管理規范》組織生產；企業應具備相應的專業技術人員，相適應的儀器設備和生產環境。
（三）診斷試劑的研制應當按照科學、規范的原則組織研發，各反應條件的選擇和確定應符合基本的科學原理。
（四）研制生產過程中所用的材料及工藝，應充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。
二、原材料質量控制
（一）主要生物原料
與生產的產品質量最密切相關的生物原料包括各種活性抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類生物原科。這類原料可用于膠體金標記、包被硝酸纖維膜及用于制備質控線的抗原或抗體等。
1、外觀
肉眼觀察，大部分生物原料為澄清透明的液體，不含異物，渾濁或搖不散的沉淀，或者為白色粉末，不含有其他顏色的雜質，特殊生物原料應具備相應外觀標準。
2、純度和分子量
主要通過SDS-PAGE電泳和電泳結果掃描儀進行檢測，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據所檢測生物原料的分子量選擇適宜丙烯酸胺凝膠濃度進行電泳。一般情況下，每個電泳道加樣量為5mg，同時用已知分子量標準作參照，采用合適的電泳電流和電泳時間；電泳后的凝膠可用考瑪氏亮藍染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量。作為免疫診斷試劑用生物原材料，用銀染法染色后，純度一般都要大于90％，用考瑪氏亮藍染色后，純度一般都要大于95％。
3、蛋白濃度
蛋白濃度可通過Lowry法、208nm光吸收法、雙縮脲方法等進行檢測。
4、效價
效價的測定一般根據蛋白含量測定結果通過倍比稀釋法進行，效價應達到規定的要求。
5、功能性實驗
功能性實驗是指標生物原料用于試劑盒試劑實際生產中的情況，一般考查該原料使用后的試劑靈敏度、特異性和穩定性。用于制備制控線的抗原或抗體可采用其他適宜方法進行功能性實驗。
（二）生物輔料
生物輔料指的是在生產過程中作為蛋白保護劑用途的一類生物原料，主要包括牛血清白蛋白材料等。這些生物原料的質量標準應符合2000年版的《中國生物制品主要原輔材料質檢標準》上規定的標準要求，并且要適合于企業的生產。
牛血清白蛋白
外觀：應為淺黃色凍干粉末，無吸潮，無結塊，無肉眼可見的其他雜質顆粒。
溶解性：將牛血清白蛋白配成10％溶液，溶解時間應不大于15分鐘。1％水溶液的pH值：6.5~7.1；1％水溶液OD403值：＜0.15。
總蛋白含量：用雙縮脈方法來測定，質量標準為≥95％。
硫酸銨含量：納氏試劑法測定，通過用標準硫酸銨曲線可查出硫酸銨含量，其標準為≤0.1%。
尿素含量：采用二乙酸一肟法測定，通過用標準尿素曲線可查出尿素含量，其標準為≤0.1%。
總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法。其標準為95％。
BSA的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標準為≥90％。
功能性試驗：10％作為樣本進行酶聯免疫測定，不得出現特異性反應。
（三）化學原材料
參照《中國生物制品主要原輔材料質控標準》分析純級別檢定。主要的檢測指標包括一些基本的一般鹽類檢測、溶液PH值檢測。溶解情況的檢測、干燥失重的檢測。熾灼殘渣等。
1、無機類
主要包括有氯金酸、氯化鈉、磷酸氫二鈉。磷酸二氯鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉等。
2、有機類
主要包括有枸櫞酸、枸櫞酸鈉、蔗糖、吐溫20、乙二胺四乙酸二鈉、三羥基氨基甲烷、氨基吡啉、溴化鉀、氫氧化鈉、葡萄糖、硫酸銨、硫氫酸鉀等。
（四）其他原輔料
1、硝酸纖維素膜
硝酸纖維素膜應具有厚度、孔徑大小等要求，毛細遷移速度，韌性(切割時膜破損引起的廢品率）、均一性（厚度偏差范圍、毛細遷移速度偏差范圍）應達到規定的要求。
2、玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙
玻璃纖維或聚酯纖維膜及濾紙應具有厚度、毛細遷移速度、重量等要求，均一性（厚度偏差范圍，毛細遷移速度偏差范圍，重量偏差范圍）應達到規定的要求。
3、玻璃纖維膜
適用于全血檢測的金標試劑，過濾紅細胞所用玻璃纖維膜或其他材料具有不吸附蛋白質的特點，應具有厚度、孔徑大小等要求。
4、塑料襯片
塑料襯片應具有厚度、硬度（切割時一次未能整條切下的百分率）、尺寸（與標識吻合）、粘性（切割時造成玻璃纖維與塑料襯片分離的百分率）等要求。
5、其他
粘膠紙、鋁箔袋、說明書、包裝外盒、瓶子和干燥劑等應建立相應質量控制標準。
三、試劑盒的制備
本類試劑的生產包括膠體金及膠體金標記抗原或抗體的制備，膠體金標記的包被，檢測線及質控線的制備，膠體金標記物、包被抗原或抗體等濃度確定，各種工作溶液的配置等步驟，并通過產品的半成品檢定和成品檢定兩個質控過程來完成。
（一）膠體金標記物的制備
采用枸櫞酸三鈉還原法或其他方法制備膠體金，膠體金顆粒大小應符合規定，膠體金標記物在510~550nm波長處應有最大吸收值，置2~8℃保存，應在規定的保存期內使用。采用合適的方法確定膠體金標記物、包被抗原或抗體工作濃度，將工作濃度的膠體金標記物吸附于玻璃纖維或聚酯纖維膜上。
（二）檢測線及質控線的制備
取已確定使用濃度的相關抗原或抗體，在硝酸纖維素膜上制備檢測線，應用同樣方法制備質控線，根據生產工藝在規定的溫度、濕度條件下干燥，置規定的濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）條件下存放。檢測線與質控線應具有間隔距離要求，應對所用的金標記用玻璃纖維及硝酸纖維素膜等進行質量檢測，如尺寸、外觀、包裝及吸附性能等，并記錄批號、數目、標識，不同批號的玻璃纖維及硝酸纖維素膜應當不要混用了。
（三）貼膜、切割、裝袋
貼膜、切割及裝袋應在具有濕度（通過驗證方法確定相對濕度要求）要求條件下操作，切割的膜條應有寬度要求。
四、質量控制
用于半成品及成品質量控制的質控品包括靈敏度、特異性、均一性等指標，如具有國家標準品或參考品的產品應使用國家標準品（參考品）或經標化質控品進行檢定。
（一）半成品質控品
1、半成品抽樣
檢驗人員按批號抽取規定數量的半成品，作號標記，待檢。
2、半成品檢定
對所抽樣的半成品做靈敏度、特異性、均一性等試劑盒性能方面的檢測，應符合質量標準。
（二）成品質控品
1、物理檢查
應進行外觀是否平整，材料附著是否牢固，液體移行速度，膜條寬度等物理檢查，應符合質量標準。
2、性能方面的檢測
靈敏度、特異性、均一性等試劑盒性能方面的檢測，應符合質量標準。
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